[실험] Cytokine array 가 뭘까? - R&D system 의 cytokine array 사용방법은? ①

최근 줄기세포배양액을 함유한 화장품이 큰 관심을 모으면서

 

세포배양액의 효능을 밝히는 실험들이 점점 많아지고 있다.

 

효능이 좋은 세포가 분비해내는 물질들은 당연히 효능이 좋을 것이니

 

이 배양액을 가지고 화장품이나 치료제를 개발하는 것이 당연한 논리!!

 

 

그래서 Exosome이나 microvesicle 등 다양한 물질들을 분리하는 방법과,

 

그 배양액 자체를 이용한 실험방법들이 많아지고 있다!

 

 

그런데 그 세포가 어떤 물질을 분비해내는지 어떻게 알 수 있을까?

 

내가 보고자하는 물질을 확실히 알고 있다면

 

그 물질만을 detection하는 ELISA나, western blot 을 이용해서

 

내 세포가 얼마나 그 물질을 분비해내는지를 정량적으로 분석할 수 있다.

 

하지만 내 세포가 어떤 물질을 분비해내는지 모른다면?

 

어떤 실험법으로 확인할 수 있을까?

 

 

굉장히 다양한 방법이 있을테지만,

 

가장 간단한 방법은 Cytokine array다.

 

cytokine array는 하나의 키트를 이용해서

 

많은 cytokine과 growth factor들을

 

어느 정도 가지고 있는지 정성분석을 할 수 있다.

 

ELISA는 단 하나의 물질을 정량분석할 수 있는 기능을 하므로,

 

조성을 모르는 배양액 분석을 하는 실험을 할 때에는

 

cytokine array를 해서 어떤 단백질을 가지고 있는지 대략적으로 분석해내고,

 

ELISA나 western blot 으로 얼마나 가지고 있는지 정량분석을 하는게 좋다.

 

하지만 cytokine array도 단점은 있다.

 

정량분석을 할 수 없고, 키트에 디자인 된 물질들만 확인 할 수 있다.

 

물론 커스텀 제작이 가능하다고는 하지만

 

가격이 후덜덜하다...

 

심지어 배송기간도 정말 너무 늦다 ㅠㅠ

 

저번에는 시켰는데 거의 세달만에 받았다.

 

실험의 호흡이 굉장히 길어진다 ㅠㅠ

 

나는 다양한 cytokine array를 써 봤는데

 

그 중 R&D system 의 cytokine array이가 평판도 좋고 결과도 잘 나왔다!

 

무튼!! 이번에는 cytokine array를 어떻게 하는지 방법을 알아보자!

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출처_R&D system

내가 쓴 cytokine array의 Catalog number는 ARY005B다.

 

이 친구가 찍을 수 있는 단백질 목록!

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해당 키트를 사용하기 전에 모든 시약들을 상온에 두고 온도를 좀 올린다.

 

주의사항으로는

 

납작한 핀셋을 이용할 것, 장갑을 필수적으로 낄 것!

 

Reagent 준비방법은?

 

Detection Antibody cocktail은 1vial있는데, DW 100ul 넣어서 섞어둘 것.

 

1X wash buffer를 만들어야 하는데,

 

만약 결정화되어 있으면 상온에서 잘 섞어주면서 결정을 완전히 녹여준다.

 

25x wash buffer 이므로 40ml wash buffer 를 960ml 의 DW에 섞어서 1L를 만든다.

 

(아낀다고 양 적게 만들지 말자.

 

어차피 한 키트에 4장 들어있고, control 이랑 샘플 몇개하면 전부 다 쓰게 되더라.

 

모자라면 실험 하다가 만들고 이래야 하니깐 그냥 다 털어서 만들어 놓자!)

 

Chemi Reagent Mix 는 사용 전 15분 전에 만들어야한다.

 

Chemi Reagent 1과 2가 있는데, 같은 볼륨으로 섞어준다.

 

(뭔가 western blot 의 ECL 같은 느낌..? ㅋㅋㅋ)

 

1개의 멤브레인 당 1ml 필요하니까 500ul 씩 해서 만들어 준다.

 

내가 분석할 샘플은 적어도 1ml 가 필요하다.

 

샘플 채취 후 바로 사용하지 않는다면 -20℃에서 보관한 다음

 

측정 전에 녹여서 ice에 넣어두자!

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여기까지 cytokine array 준비과정을 기술해보았다.

 

포스팅이 너무 길어져서 여기서 끊어야겠다 ㅠㅠ

 

다음에는 진행과정에 대해서 알아보자!

 

(물론 다른 키트를 사용하면 사용법은 달라진다!! 

 

내꺼는 R&D system 의 ARY005B 제품!)