[실험] Cytokine array 가 뭘까? - R&D system 의 cytokine array 사용방법은? ②

자, 이전 포스팅에서 대략적인 기본배경과

 

시약준비과정을 배웠으니, 

 

이제 진짜 진행과정을 배워보자.

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cytokine array. 출처_raybiotech

1. 먼저 시약과 샘플을 준비과정에 따라 준비한다.

 

2. 키트에 포함되어 있는 well plate에 Array buffer 4를 2ml씩 분주한다.

(Array buffer 4는 blocking 역할을 한다.)

 

3. 납작한 핀셋을 이용해서 멤브레인의 보호필름을 제거하고

 

Array buffer 4 가 들어있는 well plate에 넣는다.

 

4. shaker 위에서 상온에서 1시간동안 반응시킨다.

 

5. 멤브레인이 blocking 될 동안에 샘플을 준비한다.

 

새로운 튜브에 Array buffer 4를 0.5ml 넣고 샘플을 1ml 넣어서 토탈 1.5ml를 만든다.

 

만약 샘플이 부족하면 Array buffer 5를 이용해서 총 1.5ml를 만든다.

 

6. 준비된 샘플에 Cytokine array Detection antibody cocktail를 15ul 넣고 상온에서 1시간 반응시킨다.

 

7. well plate에 있는 array buffer 4를 제거하고 5, 6단계에서 만든 샘플/안티바디 믹스쳐를 넣어준다.

 

8. 2~8℃에서 shaker위에 두고 overnight 반응시킨다.

(최적감도가 필요하지 않으면 짧게 해도 된다!)

 

9. 조심스럽게 멤브레인을 빼내서 개별 플라스틱 용기에 20ml의 1x wash buffer를 넣고

 

멤브레인을 그 곳에 넣어 잘 씻어준다.

 

well plate는 증류수로 잘 씻어서 완전히 말려둔다.

 

10. 1x wash buffer 로 총 3번 shaker 를 이용해서 세척한다.

 

11. Streptavidin-HRP를 희석해야하는데, 바이알에 적혀있는 희석배수에 맞게 Array buffer 5를 이용해서 희석한다.

 

희석된 Streptavidin-HRP를 아까 말려둔 well plate 에 2ml 씩 분주한다.

 

12. 멤브레인에 묻어있는 wash buffer를 제거한다. 멤브레인 가장자리를 휴지로 톡톡쳐서 제거한다.

 

그 다음 멤브레인을 well plate에 넣고 뚜껑을 덮는다.

 

13. shaker 위에서 상온에서 30분간 반응시킨다.

 

14. 단계 9와 10을 반복한다. 이제부터 한번에 진행해야 한다! 중단하면 안됨!

 

15. 멤브레인을 다시 휴지를 이용해서 wash buffer를 제거하고 array number가 위를 향하도록

 

플라스틱 시트 protector의 바닥시트에 멤브레인을 놓는다.

 

16. chemi reagent mix를 1ml 만들고 각 멤브레인에 고르게 뿌려준다.

 

1ml가 안되면 결과가 좋지 않을 수 있으니 주의할 것!

 

17. 플라스틱 시트 protector 의 상단 시트로 조심스럽게 멤브레인을 덮어서 기포를 제거한다.

 

chemi reagent mix가 멤브레인의 모든 모서리에 고르게 퍼지도록 하고 1분간 둔다.

 

18. 멤브레인을 포함한 플라스틱 시트 protector의 상단과 측면에 휴지를 두고

 

chemi reagent mix를 조심스럽게 짜낸다.

 

19. 플라스틱 시트 protector의 상단시트를 제거하고 멤브레인 위에 흡수성 휴지를 조심히 놓은 다음에

 

chemi reagent mix를 닦아낸다.

 

20. 플라스틱 시트 protector 바닥시트를 멤브레인에 남겨두고, 공기방울이 제거되도록 주의하면서

 

플라스틱 랩으로 멤브레인을 덮는다.

 

여분의 플라스틱 랩을 protector 뒷면에 감아서

 

멤브레인과 시트 프로텍터를 완전히 감싼다.

 

21. array number가 위를 향하게 둔다음 케미닥으로 촬영한다!!

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여기까지 하면 내가 사용한 키트의 프로토콜이 완료된다.

 

별거 없이 쉬운 프로토콜이지만 처음 접하는 사람들은 어려울 수 있다.

 

반응시키는 시간 제외하면 그래도 빨리 끝낼 수 있다!

 

내 샘플이 어떻게 나왔는지는 비밀 ㅋㅋㅋㅋㅋ

 

아무튼!!! 다들 키우는 배양액에 뭐 들어있는지 

 

한번 이 제품으로 확인해보시라~~~ ^^*

 

 

 

아참, 광고 아니다.. 그냥 내가 나중에 쓰기위한 프로토콜 정리일 뿐

 

크.. R&D system 에서 광고받고 싶다.

 

ㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋㅋ